Lo scopo principale di questo studio era di valutare il valore diagnostico dell’antigene SAG1 ricombinante (rSAG1) nello   screening di T. gondii   -IgG con il kit ELISA Human Toxo IgG (K). rSAG1 è stato espresso in    E. coli    (DE3) e purificato mediante cromatografia per affinità dei metalli. rSAG1 è stato verificato mediante immunoblotting e conteneva una banda di 35 kDa. Un totale di 400 sieri umani sono stati testati dal LAT e dal K. Centoventidue (30,5%) sieri sono risultati positivi al LAT e ottantanove (22,25%) sieri sono risultati positivi al test K. Dei 400 campioni, 80 sono stati selezionati per valutare le prestazioni di K con un kit commerciale   Toxoplasma gondii    IgG ELISA (C). Degli 80 sieri umani, 55 (68,75%) erano positivi, 25 (31,25%) erano negativi rispettivamente per K e C . Il valore di cut-off per K era 0,398 ed è stato calcolato dalla curva caratteristica dell’operatore del ricevitore. Le piastre ELISA sono state rivestite alla concentrazione ottimizzata di rSAG1 = 0,125 µg/ml e il test è stato eseguito diluendo i sieri 1:50. È stato osservato che la sensibilità e la specificità di K erano rispettivamente del 98,5% e del 100%. Sei sieri (K   ^–   L   ⁺   ) sono risultati positivi al LAT e questi sieri umani sono stati successivamente valutati mediante analisi Western blot. Questi sieri non hanno mostrato una banda corrispondente a 35 kDa nell’analisi WB, quindi LAT ha dato risultati falsi positivi.

LOD e LLOQ erano rispettivamente 0,002 µg/L e 0,05 µg/L. Quando la concentrazione di Microcystins superava i 5 µg/L, si raccomandava di diluire i campioni nell’intervallo di lavoro prima del rilevamento.

La specificità è stata valutata per sette analoghi della microcistina e tre aminoacidi, indicando che la reattività crociata era inferiore al 30%. Questi risultati hanno mostrato che il kit ELISA era soddisfacente per il rilevamento delle microcistine nell’acqua.

• Lo scopo era valutare l’uso di un kit ELISA per procalcitonina bovina (PCT) (Cusabio, Cina) per la valutazione della PCT in campioni di latte vaccino. La validazione è stata eseguita con 10 campioni di plasma e i corrispondenti campioni di latte di vacche mastite.
• È stato calcolato il limite di rilevamento (LOD). Sono stati valutati il ​​coefficiente di variazione (CV%) delle letture di cinque campioni di plasma misurati cinque volte sulla stessa piastra   (all’interno del dosaggio) e il CV% degli stessi cinque campioni letti cinque volte su tre piastre separate. Il parallelismo è stato determinato mediante diluizioni seriali doppie di cinque plasmi e dei corrispondenti campioni di latte.
• I campioni di latte sono stati analizzati con e senza centrifugazione. Per la PCT plasmatica, il metodo ha mostrato tra- e intra-CV <23,7% e il parallelismo ha mostrato valori di recupero molto buoni. Il kit ELISA testato può misurare le concentrazioni di PCT nel plasma dei bovini.
• Gli anticorpi nel kit non legavano la PCT nei campioni di latte perché tutti i campioni di latte centrifugato mostravano un LOD inferiore rispetto ai campioni bianchi. Solo tre campioni di latte non centrifugato hanno mostrato concentrazioni misurabili di PCT. A causa di questi risultati, non è stato possibile utilizzare il kit ELISA commerciale testato per rilevare la PCT nei campioni di latte.

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1. È generalmente accettato che l’avena pura sia sicura per la maggior parte dei pazienti celiaci e il consumo di avena fornisce fibre alimentari benefiche. Tuttavia, l’avena può essere contaminata con le proteine ​​del glutine di frumento, orzo e/o segale. La sfida analitica è l’affidabilità del metodo di quantificazione e il mantenimento del livello di contaminazione al di sotto della soglia senza glutine di 20 mg/kg. In questo studio, abbiamo testato campioni di farina d’avena fortificata con orzo a quattro livelli con quattro kit ELISA per il glutine. La più grande varianza di recupero è stata nel set R5, che ha sovrastimato di 5-6 volte; il kit G12 ha reagito in modo incrociato con le proteine ​​dell’avena e ha fornito una sovrastima di 4-5 volte a tutti i livelli elevati.
2. I set Total Gluten e Morinaga hanno dato un recupero soddisfacente. Orde d’orzo totali sono state isolate e caratterizzate per l’uso come calibratore comune in tutti e quattro i kit per standardizzare i risultati e testare le prestazioni dei kit. L’immunoblotting dell’isolato di ordeina totale ha rivelato che gli anticorpi Total Gluten e Morinaga forniscono un rilevamento generale, mentre gli anticorpi R5 e G12 riconoscono gruppi specifici di ordeine, portando a una maggiore differenza quando il grano e l’orzo sono stati usati come calibratori. La calibrazione con l’isolato di ordeina totale ha corretto il problema della sovrastima e ridotto la variabilità tra i quattro gruppi di glutine.

Validazione semplificata del kit ELISA per la determinazione delle microcistine nelle acque superficiali.

• Come metodo universale per la determinazione delle microcistine, il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) è importante per il rilevamento rapido della contaminazione da microcistina. Lo scopo di questo studio era quello di proporre un metodo semplificato per convalidare il kit Microcystins ELISA riassumendo i documenti e le linee guida correlati. Dopo aver riassunto e spiegato i 20 parametri di validazione,   sono stati selezionati 11 parametri per semplificare la validazione del kit Microcystins ELISA.
• Inoltre, sono stati analizzati l’intervallo accettabile e i dettagli di convalida per ciascun parametro. I risultati hanno indicato che il coefficiente di determinazione della curva standard Microcystin-LR era maggiore di 0,99. La concentrazione dei campioni di controllo qualità rientrava nei limiti di controllo. L’accuratezza dei campioni arricchiti e funzionali variava tra il 70% e il 130%. La variabilità intra-saggio, inter-saggio e riproducibilità era rispettivamente inferiore a 11, 15 e 21%.

In questo studio, abbiamo sviluppato un test rGroEL   _1-524    IgM-ELISA specifico per il tipo da utilizzare nella diagnosi di screening della sospetta leptospirosi in pazienti con malattia febbrile acuta e indifferenziata con febbre acuta.

L’accuratezza diagnostica di rGroEL   _1-524    IgM-ELISA, Panbio IgM-ELISA commerciale e Virion-Serion Classic IgG-ELISA sono state valutate utilizzando 133 sieri di leptospirosi tailandese e 210 controlli. La sensibilità era del 91,7%, 59,6% e 17,7% per l’infezione acuta e le specificità erano rispettivamente del 92,6%, 90,2% e 88,3% per il controllo senza leptospirosi. Il test rGroEL   _1-524    IgM-ELISA aveva un’elevata sensibilità del 92,3% e del 91,7% per le colture MAT positive e negative, rispettivamente, 1-3 giorni dopo l’insorgenza dei sintomi (DPO1-3).C’era una specificità alterata per il tifo, probabilmente a causa della reattività crociata degli anticorpi con l’ortologo GroEL. Panbio IgM-ELISA commerciale ha mostrato una sensibilità a DPO1-3 del 30,8% e 41,7% per colture MAT positive e negative, mentre Virion-Serion IgG-ELISA ha mostrato una sensibilità   rispettivamente del 5,9% e del 13,3%. Il test rGroEL   _1-524    IgM-ELISA può essere utile come test di screening per la diagnosi precoce. I risultati commerciali dell’ELISA suggeriscono l’utilità dell’IgM-ELISA per la diagnosi, mentre il test IgG-ELISA è utile per gli studi di sieroprevalenza. Si raccomanda comunque la conferma con i test di riferimento.

L’alphaherpesvirus-1 bovino (BoHV-1), l’agente eziologico della rinotracheite bovina infettiva (IBR), è un patogeno virale economicamente importante che attacca bovini e bufali.

I test sierologici sono più comunemente usati per rilevare gli anticorpi, ma è stata rilevata variabilità nelle prestazioni diagnostiche dei singoli test. In questo studio, quattro kit ELISA disponibili in commercio {due ELISA indiretti (kit A e B) e due ELISA bloccanti (kit C e D)} sono stati valutati per il  rilevamento di anticorpi contro BoHV-1 in bovini e bufali indiani (bersaglio fitness). La sensibilità diagnostica (dsn) e la specificità (dsp) di questi kit sono state determinate in tre modi; considerando il test di neutralizzazione del virus (VNT) come il gold standard del test, utilizzando le informazioni sui campioni e la maggior parte dei test prima del test. Uno screening di 200 sieri negativi noti (124 bovini, 76 bufali) provenienti da allevamenti privi di IBR ha mostrato che i kit ELISA basati su gB sono più specifici dei kit ELISA indiretti.

Il test di 125 sieri noti positivi (81 bovini, 44 bufali) suggerisce che il set B è il più sensibile, seguito dal set C, A e   D. È interessante notare che il set D sembrava essere il più sensibile al rilevamento degli anticorpi BoHV-1 indotti dalla vaccinazione , seguito dal set B. Una tendenza simile è stata osservata anche nell’esperimento del limite di diluizione eseguito con sieri noti infetti e inoculati. VNT è risultato essere il test più specifico e il suo utilizzo come test gold standard ha mostrato che tutti i kit avevano una sensibilità superiore al 99%.