La polmonite causata da Staphylococcus aureus è associata a un’elevata mortalità, indipendentemente dalla suscettibilità agli antibiotici.

Entrambi i ceppi MRSA e MSSA producono potenti citotossine: alfa-emolisina (Hla) e fino a cinque leucocidine – LukSF-PV, HlgAB, HlgCB, LukED e LukGH (LukAB) – per evitare i meccanismi di difesa innati dell’ospite. È stato dimostrato che le citotossine neutralizzanti forniscono un beneficio di sopravvivenza nei modelli di coniglio con polmonite da S. aureus. Abbiamo studiato i meccanismi di protezione di ASN100, una combinazione di due anticorpi monoclonali umani (mAb), ASN-1 e ASN-2, che insieme neutralizzano Hla e cinque leucocidine, nei modelli di polmonite di coniglio MRSA e MSSA.

Dopo l’immunizzazione profilattica passiva  , l’ASN100 ha mostrato un aumento dose-dipendente della sopravvivenza ed è stato completamente protettivo contro tutti i ceppi di S. aureus testati a dosi di 5 o 20 mg/kg. La patologia polmonare macroscopica e microscopica, il tasso di gonfiore e la carica batterica sono stati valutati 12 ore dopo l’infezione e ridotti con ASN100. L’analisi farmacocinetica di ASN100 nel liquido di lavaggio broncoalveolare di animali non infetti ha mostrato un’efficace penetrazione del liquido epiteliale epiteliale, raggiungendo livelli di picco tra 24 e 48 ore dopo la somministrazione paragonabili alla concentrazione di mAb misurata nel siero. Questi dati confermano che l’ASN100 mAb neutralizza le potenti citotossine di S. aureus nei polmoni e previene i danni alla barriera mucosa e alle cellule immunitarie innate.

 

Conigli transgenici per geni IgG umani.

Obiettivo Preparare anticorpi secondari universali che possono legarsi a IgG di topo e coniglio e utilizzare gli anticorpi in una varietà di test immunologici. Metodi I  geni di fusione della proteina stafilococcica A (SPA), della proteina G dello streptococco (SPG) e della perossidasi di rafano (HRP) sono stati sintetizzati e clonati nel vettore pcDNATM 3.1  per generare plasmidi di espressione eucariotica. I plasmidi sono stati trasfettati transitoriamente in cellule HEK293F per l’espressione.

La proteina di fusione espressa dal plasmide è stata rilevata mediante SDS-PAGE e Western blotting e la sua immunoattività è stata misurata mediante Western blotting, ELISA e colorazione immunoistochimica. Risultati La digestione con enzimi di restrizione e sequenziamento genico ha mostrato che i plasmidi pPA-HRP, pPG-HRP e pPA/G-HRP sono stati generati con successo. La colorazione blu brillante con Coomassie e Western blot ha mostrato che le proteine ​​di fusione PA-HRP, PG-HRP e PA / G-HRP sono state espresse con successo nelle cellule HEK293F. Western blot, ELISA e colorazione immunoistochimica hanno mostrato che le IgG di topo e coniglio potevano essere riconosciute e legate dai tre tipi di proteine ​​di fusione, di cui la proteina di fusione PA/G-HRP mostrava la più alta affinità.

 

Gli animali transgenici contenenti geni di anticorpi umani sono estremamente attraenti per lo sviluppo di farmaci perché bypassano le successive procedure di umanizzazione degli anticorpi richieste per la traduzione terapeutica.

  • Le piattaforme transgeniche sono state create in precedenza utilizzando topi, ma più recentemente anche ratti, polli e mucche e ora sono ampiamente utilizzate nello sviluppo di farmaci. Tuttavia, la generazione di anticorpi a base di coniglio, con grandi guadagni in termini di specificità e affinità, è in grado di coinvolgere la diversificazione della sequenza attraverso la conversione genica, migliorando così la maturazione del legame e migliorando la varianza/selezione degli anticorpi di partenza in un modo diverso rispetto ai roditori.
  • Poiché inoltre spesso consente una buona generazione di un buon legame contro antigeni che sono solo debolmente immunogenici in altri organismi, è una specie molto interessante per la produzione di anticorpi terapeutici. Qui descriviamo la produzione, l’uso e l’analisi del primo ceppo di coniglio transgenico per la produzione di anticorpi umani.
  • Eliminando i geni IgM endogeni e introducendo sequenze di immunoglobuline umane,  questo ceppo di coniglio è stato progettato per generare un repertorio molto diversificato di anticorpi IgG umani. Inoltre, abbiamo introdotto i geni umani CD79a / b e Bcl2 (linfoma a cellule B 2) che migliorano l’espressione del recettore delle cellule B e la sopravvivenza delle cellule B.
  • Dopo l’immunizzazione contro il fattore angiogenico BMP9 (proteine ​​morfogenetiche ossee 9), siamo stati in grado di isolare una serie di anticorpi neutralizzanti altamente affini e specifici da questi conigli. L’analisi della sequenza di questi leganti ha mostrato che sia l’ipermutazione somatica che la conversione genica sono pienamente funzionali in questo ceppo, senza pregiudicare un grado molto elevato di umanità. Questa nuova potente strategia transgenica consentirà l’ulteriore espansione dell’uso dei meccanismi immunitari endogeni nello sviluppo di farmaci.

Gli autori descrivono la preparazione di nanofiori in oro platino (AuPt NFs) e mostrano che possono essere utilizzati contemporaneamente come marcatore e come imitatore nei saggi immunologici a flusso laterale (LFI).

AuPt NF sono stati preparati coltivando nanofili di Pt sulla superficie delle nanoparticelle d’oro. Il test prevede la cattura delle proteine ​​bersaglio (qui: IgG di coniglio come analita modello) da un anticorpo di cattura immobilizzato e l’utilizzo di un anticorpo secondario marcato con AuPt NF. In questo modo, AuPt NF vengono catturati dalla zona del test e producono una caratteristica striscia nera per il rilevamento dell’antigene visivo (IgG). Il colore della linea del test può essere ulteriormente migliorato aggiungendo un substrato cromogenico3-ammino-9-etilcarbazolo che viene ossidato cataliticamente dai nanofili di Pt catturati su AuPt NF e produce un colore rosso. I risultati quantitativi sono stati ottenuti leggendo le intensità della linea del test con un lettore di strisce portatile. LFI ha un limite di rilevamento di 5 µg mL-1 per IgG in condizioni sperimentali ottimizzate. Questo è 100 volte inferiore a un LFI convenzionale basato su AuNP.

È possibile che questo test abbia una portata ampia in quanto può essere utilizzato per molti altri scopi per i quali sono disponibili anticorpi adatti. Abstract grafico I nanofiori in oro e platino sono usati come etichetta e come enzima mimico in un test immunologico a flusso laterale IgG altamente sensibile. Il limite di rilevamento del  test di flusso laterale di nanofiori di oro e platino è 100 volte inferiore a quello del test di flusso laterale di nanoparticelle d’oro convenzionale.

Der p 5 è ​​uno dei più importanti allergeni degli acari della polvere domestica in Algeria; questo allergene è spesso riconosciuto dai pazienti con asma allergico. Tuttavia, non ci sono informazioni sui suoi epitopi di legame IgG. Nel presente studio, i conigli sono stati immunizzati con l’allergene Der p 5 ricombinante e sono stati raccolti campioni di siero. Il riconoscimento degli epitopi IgG Der p 5 lineari è stato determinato utilizzando peptidi sintetizzati derivati ​​dalla sequenza di allergeni.

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-g-96T DL Develop 96T 601 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Hu-48T DL Develop 48T 239 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Hu-96T DL Develop 96T 292 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Mu-48T DL Develop 48T 328 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Mu-96T DL Develop 96T 415 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-p-48T DL Develop 48T 456 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-p-96T DL Develop 96T 590 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Ra-48T DL Develop 48T 334 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Ra-96T DL Develop 96T 422 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-b-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 473 EUR

Bovine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-b-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 654 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-c-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 455 EUR

Canine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-c-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 629 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Eq-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 358 EUR

Equine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Eq-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 490 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-g-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 482 EUR

Goat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-g-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 667 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Hu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 216 EUR

Human Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Hu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 287 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Mu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 321 EUR

Mouse Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Mu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 438 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-p-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 473 EUR

Porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-p-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 654 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Ra-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 328 EUR

Rat Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Ra-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 447 EUR

Rabbit IgG

E61I018 EnoGene 1mg 343 EUR

Rabbit IgG

31-1007 Fitzgerald 1 g 350 EUR

Rabbit IgG

31R-1049 Fitzgerald 10 mg 136 EUR

Rabbit IgG

31R-AR002 Fitzgerald 25 mg 381 EUR

Rabbit IgG

1268-100 Biovision 153 EUR

Rabbit IgG

1268-1000 Biovision 370 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Gu-48T DL Develop 48T 315 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

DLR-IgG-Gu-96T DL Develop 96T 396 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Gu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 305 EUR

Guinea pig Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit

RDR-IgG-Gu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 415 EUR

Rabbit Control IgG

AC005 Abclonal 100 ul 133 EUR

Rabbit IgG Protein

abx061435-1g Abbexa 1 g 599 EUR

Goat Rabbit IgG

A21020-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A21020-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Rabbit Goat IgG

A21030-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Rabbit Goat IgG

A21030-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A21120-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A21120-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A21220-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A21220-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A22120-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A22120-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A22220-01ml Abbkine 0.1ml 77 EUR

Goat Rabbit IgG

A22220-05ml Abbkine 0.5ml 158 EUR

Goat Rabbit IgG

A23020-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23020-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23120-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23120-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23130-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23130-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23220-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23220-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23230-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23230-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23320-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23320-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23330-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23330-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23420-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23420-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23430-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23430-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23620-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23620-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Goat IgG

A23630-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Rabbit Goat IgG

A23630-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23720-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23720-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Goat Rabbit IgG

A23920-01ml Abbkine 0.1ml 93 EUR

Goat Rabbit IgG

A23920-05ml Abbkine 0.5ml 224 EUR

Rabbit Rubella IgG

QY-E30313 Qayee Biotechnology 96T 374 EUR

Rabbit Measles IgG

QY-E30314 Qayee Biotechnology 96T 374 EUR

Rabbit IgG-UNLB

LF-SA8070U Abfrontier 10 mg Ask for price

Rabbit IgG (HRP)

65C-CH1103 Fitzgerald 1 mg 247 EUR

Rabbit IgG (Fc)

31C-CH1104 Fitzgerald 1 mg 403 EUR

Rabbit IgG protein

31R-1060 Fitzgerald 10 mg 187 EUR

Rabbit IgG Fab

31R-1071 Fitzgerald 1 mg 457 EUR

Rabbit IgG Fc

31R-1072 Fitzgerald 1 mg 381 EUR

Rabbit IgG Control

31R-AR001 Fitzgerald 500 ug 133 EUR

Rabbit Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit

GA-E0125RB-48T GenAsia Biotech 48T 326 EUR

Rabbit Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit

GA-E0125RB-96T GenAsia Biotech 96T 524 EUR

Rabbit Anti-Human IgG (Fc) IgG, unlabeled

10119-R Alpha Diagnostics 0.5 mg 141 EUR

Rabbit OVA IgG(Ovalbumin IgG) ELISA Kit

ERB0151 FN Test 96T 567.6 EUR

Rabbit Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit

QY-E30174 Qayee Biotechnology 96T 374 EUR

Rabbit IgG antiserum (Goat)

PSA1 GroPep 625 µl 299 EUR

Rabbit Anti Human IgG

E61I00101 EnoGene 100ug 343 EUR

Rabbit anti mouse IgG

E61I00901 EnoGene 100ug 343 EUR

Rabbit anti Sheep IgG

E61I01001 EnoGene 100ul 343 EUR

Rabbit anti Goat IgG

E61I01002 EnoGene 1mg 343 EUR

Rabbit anti RBC IgG

E61I01102 EnoGene 1mg 343 EUR

goat Anti Rabbit IgG

E61I01301 EnoGene 1mg 274 EUR

Rabbit anti Pig IgG

E61I02301 EnoGene 0.1mg 343 EUR

Rabbit anti Horse IgG

E61I02401 EnoGene 0.1mg 343 EUR

Rabbit IgG ELISA Kit

ERTI0065 Abclonal 96Tests 521 EUR

Anti-Rabbit IgG antibody

STJ16101370 St John's Laboratory 1 mg 214 EUR

Anti-Rabbit IgG antibody

STJ16101371 St John's Laboratory 1.2 mg 257 EUR

Anti-Rabbit IgG antibody

STJ16101372 St John's Laboratory 1.2 mg 306 EUR

Anti-Rabbit IgG antibody

STJ16101375 St John's Laboratory 1 mg 538 EUR

Rabbit IgG Control Sera

20009-1-200 Alpha Diagnostics 0.5 ml 103 EUR

Rabbit IgG-Agarose conjugate

20009-AS-1 Alpha Diagnostics 0.5 ml 164 EUR

Rabbit IgG Isotype Control

abx125003-100ul Abbexa 100 ul 203 EUR

Mouse Rabbit IgG LCS

A25022-01ml Abbkine 0.1ml 126 EUR

Mouse Rabbit IgG LCS

A25022-05ml Abbkine 0.5ml 354 EUR

Goat Rabbit IgG HCS

A25222-01ml Abbkine 0.1ml 126 EUR

Goat Rabbit IgG HCS

A25222-05ml Abbkine 0.5ml 354 EUR

Anti-Rabbit IgG antibody

STJ99246 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Rabbit Anti-Monkey IgG

FNSA-0099 FN Test 500 uL 306.6 EUR

Rabbit Anti-Glutathione IgG

GSH11-A Alpha Diagnostics 100 ul 482 EUR

Rabbit IgG Isotype Control

IC001-100ul SAB 100ul 122 EUR

Mouse anti Rabbit IgG

40-1005 Fitzgerald 1 mg 349 EUR

Mouse anti Rabbit IgG

40-1006 Fitzgerald 1 mg 349 EUR

Goat anti Rabbit IgG

40-GR30 Fitzgerald 100 ml 241 EUR

Goat anti Rabbit IgG

40-GR30S Fitzgerald 100 ml 133 EUR

Rabbit anti Sheep IgG

40-RS50 Fitzgerald 100 ml 133 EUR

Sheep anti Rabbit IgG

40-SR35 Fitzgerald 250 ml 133 EUR

Rabbit anti Bovine IgG

40C-CB0115 Fitzgerald 2 mg 281 EUR

Rabbit anti Bovine IgG

40C-CB0129 Fitzgerald 5 mg 347 EUR

Rabbit anti Cat IgG

40C-CB0222 Fitzgerald 2 mg 248 EUR

Rabbit anti Chicken IgG

40C-CB0322 Fitzgerald 5 mg 346 EUR

Rabbit anti Dog IgG

40C-CB0408 Fitzgerald 2 mg 273 EUR

Rabbit anti Dog IgG

40C-CB0415 Fitzgerald 5 mg 347 EUR

Rabbit anti Goat IgG

40C-CB0536 Fitzgerald 1.5 mg 269 EUR

Rabbit anti Human IgG

40C-CB0943 Fitzgerald 1 mg 249 EUR

Rabbit anti Human IgG

40C-CB0950 Fitzgerald 5 mg 381 EUR

Rabbit anti Human IgG

40C-CB0971 Fitzgerald 2 mg 322 EUR

Goat anti Rabbit IgG

40C-CB1157 Fitzgerald 5 mg 311 EUR

Rabbit anti Rat IgG

40C-CB1243 Fitzgerald 2 mg 262 EUR

Rabbit anti Sheep IgG

40C-CB1329 Fitzgerald 500 µg 380 EUR

Rabbit anti Sheep IgG

40C-CB1343 Fitzgerald 500 µg 358 EUR

Goat anti Rabbit IgG

41-GR30 Fitzgerald 10 mg 277 EUR

Goat anti Rabbit IgG

41-GR31 Fitzgerald 5 mg 162 EUR

Rabbit anti Sheep IgG

41-RS45 Fitzgerald 2 mg 273 EUR

Rabbit anti Chicken IgG

41C-CB0315 Fitzgerald 2 mg 269 EUR

Rabbit anti Goat IgG

41C-CB0529 Fitzgerald 2 mg 244 EUR

Goat anti Rabbit IgG

41C-CB1143 Fitzgerald 2 mg 278 EUR

Goat anti Rabbit IgG

41C-CB1150 Fitzgerald 10 mg 388 EUR

Goat anti Rabbit IgG

41R-1079 Fitzgerald 2 mg 149 EUR

Rabbit anti Goat IgG

20-S5801R000-VO Fitzgerald 10 ml 133 EUR

Rabbit IgG (Fab) (FITC)

65C-CH1111 Fitzgerald 1 mg 236 EUR

Rabbit IgG (Fab) (HRP)

65C-CH1112 Fitzgerald 1 mg 258 EUR

Rabbit IgG ELISA Kit

E-15G Immunology Consultants Laboratory 1 x 96 well plate 492 EUR

Rabbit IgG (Fab'2)

31C-CH1107 Fitzgerald 2 mg 339 EUR

Rabbit IgG (H + L)

31R-1019 Fitzgerald 10 mg 251 EUR

Rabbit IgG (H + L)

31R-1043 Fitzgerald 10 mg 186 EUR

Rabbit IgG Fab'2

31R-1044 Fitzgerald 2 mg 322 EUR

Rabbit Anti-Sheep IgG (Fc) IgG, aff pure

30619 Alpha Diagnostics 1 mg 213 EUR

Rabbit Anticardiolipin Antibody IgG (aCL IgG) ELISA Kit

abx362353-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Rabbit Anti-Mouse Agouti IgG, IgG aff pure

AGO11-A Alpha Diagnostics 100 ug 482 EUR

Pre-immune normal rabbit IgG

NRI01 GroPep 100 µg 299 EUR

Goat anti-rabbit IgG-HRP

E22NR02-1 EnoGene 100ul 343 EUR

Goat Anti-Rabbit IgG/HRP

E3GAR001 EnoGene 200ul 408 EUR

Rabbit Anti-Goat IgG/HRPAntibody

E3RAG001 EnoGene 200ul 408 EUR

I risultati hanno mostrato che il siero dei conigli immunizzati riconosceva i tre epitopi lineari di Der p5 (  28  EDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIK43  ), (  37IHEQIKKGELALFYLQEQ55  ) e  (  92LMQRKDLDIFEQYNLEMAKKS112  )  Più interessante, abbiamo osservato che la sequenza amminoacidica di  92  LS  112  è ben riconosciuto sia dagli anticorpi IgE che IgG. Der p 5 stimola la sintesi di anticorpi IgG specifici che riconoscono epitopi comuni ma anche nuovi rispetto al legame degli anticorpi IgE. In effetti, il potenziale per indurre anticorpi IgG può essere utilizzato per inibire il legame delle IgE umane agli allergeni, che possono essere parte del meccanismo d’azione dell’immunoterapia specifica

Leave a Reply

Il tuo indirizzo email non sarà pubblicato. I campi obbligatori sono contrassegnati *

Related Post