La pre-iniezione di pesce zebra ( Danio rerio ) tnfb L’anticorpo policlonale riduce la mortalità di Vibrio vulnificus Pesce zebra infetto

Il fattore di necrosi tumorale (TNF) svolge un ruolo importante in una tempesta di citochine infiammatorie. L’eccessiva secrezione di TNF da parte dell’ospite in risposta all’infezione aggrava la malattia. Il livello di espressione del TNF è correlato positivamente con la mortalità causata da alcune infezioni batteriche. Pertanto, l’uso di anticorpi TNF può alleviare l’infiammazione per resistere alle infezioni batteriche. La funzione dell’anticorpo di pesce TNF-b nell’infezione batterica non è ancora chiara.
In questo studio, sono stati stabiliti modelli di infezione del ceppo Vibrio vulnificus FJ03-X2 con elevata patogenicità e forte virulenza nella linea cellulare di fibroblasti di zebrafish ( Danio rerio ) (cellule ZF4) e zebrafish . Il gene Zebrafish tnfb ( Zetnf-b ) è stato clonato ed espresso da Escherichia coli BL21 (DE3) ed è stato preparato l’anticorpo policlonale Zetnf-b.
Pre-iniezione di anticorpo policlonale Zetnf-b e AG-126 prima dell’infezione con V. vulnificus potrebbe aumentare il tasso di sopravvivenza del pesce zebra rispettivamente del 36,6 e del 46,7%. La pre-iniezione dell’anticorpo policlonale Zetnf-b potrebbe ridurre efficacemente la mortalità del pesce zebra infetto da V. vulnifico . Pertanto, la terapia con anticorpi policlonali TNF potrebbe essere considerata una strategia efficace per controllare Vi. vulnificus nel pesce.

Modulating immune responses to AAV by expanded polyclonal T-regs and capsid specific chimeric antigen receptor T-regulatory cells

 

Immune responses to adeno-associated virus (AAV) capsids limit the therapeutic potential of AAV gene therapy. Herein, we model clinical immune responses by generating AAV capsid-specific chimeric antigen receptor (AAV-CAR) T cells. We then modulate immune responses to AAV capsid with AAV-CAR regulatory T cells (Tregs). AAV-CAR Tregs in vitro display phenotypical Treg surface marker expression, and functional suppression of effector T cell proliferation and cytotoxicity.

In mouse models, AAV-CAR Tregs mediated continued transgene expression from an immunogenic capsid, despite antibody responses, produced immunosuppressive cytokines, and decreased tissue inflammation. AAV-CAR Tregs are also able to bystander suppress immune responses to immunogenic transgenes similarly mediating continued transgene expression, producing immunosuppressive cytokines, and reducing tissue infiltration. Taken together, AAV-CAR T cells and AAV-CAR Tregs are directed and powerful immunosuppressive tools to model and modulate immune responses to AAV capsids and transgenes in the local environment.

 

Valutazione non clinica della sicurezza e biodistribuzione in vivo di CoviFab, un frammento F (ab ‘) 2 specifico per RBD derivato da anticorpi policlonali equini

 

La sindrome respiratoria acuta grave coronavirus 2 (SARS-CoV-2) ha richiesto lo sviluppo urgente di nuove terapie, tra le quali è contemplata l’immunoterapia passiva. CoviFab (INM005) è un frammento F (ab ‘) 2 specifico per RBD derivato da anticorpi policlonali equini. Indaghiamo la loro sicurezza preclinica e biodistribuzione mediante imaging NIR in vivo ed ex vivo dopo somministrazione endovenosa di una dose di 4 mg / kg a tempo 0 e 48 h.
Le immagini sono state scattate a 1, 12, 24, 36, 48, 49, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132 e 144 h dopo la prima iniezione endovenosa. A 96 e 144 h, i topi sono stati sacrificati per ematologia, sierochimica, patologia clinica, istopatologia e imaging ex vivo. Il profilo di biodistribuzione era simile in tutti gli organi studiati, con la massima fluorescenza a 1 h dopo ogni iniezione, diminuendo gradualmente dopo quella e fino alla fine dello studio (144 h).
Lo studio tossicologico non ha rivelato cambiamenti significativi nei parametri ematologici e sierici. Inoltre, non ci sono stati cambiamenti nell’esame macroscopico e istologico degli organi. I dati non clinici dell’attuale studio confermano che CoviFab è sicuro, senza effetti avversi osservabili nei topi. Inoltre, confermiamo che gli studi di bioimaging sono un approccio utile negli studi preclinici per determinare la biodistribuzione.

Aptameri policlonali per l’etichettatura a fluorescenza specifica e la quantificazione del batterio intestinale umano rilevante per la salute Parabacteroides distasonis 

Gli aptameri di DNA a filamento singolo come molecole di affinità per il rilevamento rapido e affidabile dei batteri intestinali sono di particolare interesse per dotare i sistemi sanitari di nuovi strumenti diagnostici robusti ed economici per monitorare il successo delle strategie di integrazione con batteri intestinali probiotici selezionati nella lotta contro i principali minacce, come l’obesità e le malattie neurodegenerative.
Il batterio intestinale umano Parabacteroides distasonis ( P. distasonis ) è positivamente associato a malattie come l’obesità, la steatosi epatica non alcolica e la sclerosi multipla con una conta cellulare ridotta in queste malattie . ed è quindi un promettente potenziale batterio probiotico per la futura integrazione microbica. In questo articolo riportiamo l’evoluzione di una specifica libreria di aptameri policlonali da parte del FluCell-SELEX a base di fluorescenza diretto contro cellule intere di P. distasonis che lega ed etichetta in modo specifico ed efficiente P. distasoni .
La libreria di aptamer ha mostrato un’elevata affinità di legame ed era adatta a discriminare quantitativamente P. distasonis da altri importanti batteri intestinali anche in miscele. Riteniamo che questa libreria contro un promettente batterio probiotico come prototipo possa aprire nuove strade verso lo sviluppo di nuovi biosensori per il monitoraggio quantitativo facile ed efficiente dell’abbondanza microbica nei microbiomi umani in generale.

Preparazione e identificazione dell’anticorpo policlonale di ratto contro la proteasi principale SARS-CoV-2 (Mpro)

 

Obiettivo Per studiare le funzioni immunologiche della proteasi principale SARS-CoV-2 (Mpro) nella malattia da coronavirus 2019 (COVID-19), è stato sviluppato un anticorpo policlonale contro Mpro. Metodi Un gene Mpro SARS-CoV-2 ottimizzato per codone è stato sintetizzato e ligato in un vettore pET-28a per la costruzione di un plasmide ricombinante denominato pET-28a-Mpro. Successivamente, questo plasmide è stato trasformato in cellule competenti di E.coli Rosetta (DE3) per l’espressione di Mpro in condizioni ottimizzate, e quindi Mpro è stato purificato utilizzando una colonna chelante HisTrap.
L’Mpro purificato è stato utilizzato come immunogeno per inoculare i ratti e il siero è stato raccolto dopo il terzo ciclo di immunizzazione. Il titolo, la selettività e la sensibilità dell’anticorpo policlonale contro Mpro sono stati analizzati utilizzando l’analisi ELISA e Western blot. Risultati È stata determinata una condizione di espressione ottimizzata nelle cellule di E.coli per Mpro e l’Mpro ricombinante è stato purificato mediante una colonna chelante HisTrap.
L’analisi ELISA e Western blot ha dimostrato che l’anticorpo policlonale altamente sensibile contro Mpro ha riconosciuto in modo speciale l’Mpro ricombinante e il titolo ha raggiunto 1: 256 000. Conclusione L’anticorpo policlonale altamente specifico contro SARS-CoV-2 Mpro è stato preparato con successo, che pone un fondamento sperimentale per studiare la funzione immunologica di Mpro in COVID-19.

Produzione e caratterizzazione di anticorpi policlonali e monoclonali della proteina poriforme della lampreda

 

Nella lampreda vertebrata senza mandibola più primitiva, la citotossicità complemento-dipendente regolata dai recettori linfocitari variabili (VLR) gioca un ruolo importante nell’immunità adattativa. I nostri studi precedenti hanno dimostrato che la proteina che forma i pori della lampreda (LPFP) ha agito come effettore terminale del VLR per lisare e uccidere le cellule bersaglio.
Qui, la proteina GST-LPFP ricombinante è stata espressa e purificata nel sistema di espressione procariotica e quindi utilizzata come immunogeno per produrre l’anticorpo monoclonale di topo e l’anticorpo policlonale di coniglio. Con questi anticorpi, abbiamo dimostrato che LPFP esisteva come omodimero nel siero di lampreda e poteva essere reclutato nella membrana delle cellule bersaglio dopo la stimolazione. In conclusione, gli anticorpi che abbiamo prodotto potrebbero riconoscere specificamente la proteina LPFP, che potrebbero essere gli strumenti utili per studiare ulteriormente il meccanismo di formazione dei pori di LPFP.

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